%0 Generic
%A Hildebrandt, Anke
%D 2009
%F heidok:10255
%K Tyrosinnitrierung , CD40-Funktion , Peroxynitrit , Zyklische DehnungAtherosclerosis , CD40 , tyrosine nitration , endothelial cells , peroxynitrite
%R 10.11588/heidok.00010255
%T Tyrosinnitrierung von CD40 als antiarteriosklerotischer Schutzmechanismus humaner Endothelzellen
%U https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/10255/
%X Die Arteriosklerose tritt im menschlichen Körper am häufigsten in mittleren und großen Arterien auf. Dabei entstehen fibröse Plaques vorzugsweise an Biegungen und Verzweigungen dieser Gefäße. Die Lokalisation der arteriosklerotischen Plaques scheint mit Bereichen verminderter laminarer Schubspannung bei gleichzeitiger zyklischer Dehnung zu korrelieren. Interaktionen von CD40 mit CD40 Ligand werden als ein wesentlicher pathogenetischer Mechanismus bei Entzündungen einschließlich der Entwicklung der Arteriosklerose angenommen. In dieser Arbeit wurde die durch zyklische Dehnung (Flexercell FX-3000) induzierte Tyrosinnitrierung von CD40, gefolgt von dessen schnellen Abbau in kultivierten humanen Endothelzellen untersucht. Die Hemmung der 20SUntereinheit des Proteasoms und die Peroxynitritscavenger Urat und FeTPPs verhinderten die dehnungsinduzierte Abnahme von CD40-Protein. Darüber hinaus war eine Tyrosinnitrierung von CD40 auch unter statischen Kulturbedingungen nach Inkubation mit exogenem Peroxynitrit oder dem Peroxynitritdonor SIN-1 nachweisbar. Weitere Untersuchungen ergaben einen signifikanten Rückgang der CD154-induziertem IL-12p40 und E-Selektin Expression auf mRNA- und Protein-Ebene nach zyklischer Dehnung oder der Exposition mit exogenem ONOO-. Dieser Effekt wurde durch eine Vorinkubation der Zellen mit Urat verhindert. Western Blot-Analysen mit immunpräzipitiertem CD40 konnten eine signifikante Abnahme der CD154-abhängigen Rekrutierung von Traf 2 und Traf 6 an CD40 nach kurzer Exposition gegenüber exogenen ONOO- nachweisen. Eine Vorinkubation der Zellen mit Urat oder die Depletierung von Cholesterin aus der Plasmamembran mit Methyl-β-Cyclodextrin stellten die CD154-vermittelte Assoziation von Traf 2 und Traf 6 mit CD40 wieder her. Zusätzliche Western Blot-Analysen ergaben eine signifikante Abnahme des CD40 Protein in der mikrosomalen Membranfraktion von HUVECs und THP-1-Monozyten nach Zugabe von exogenem ONOO-. Immunfluoreszenzfärbungen von Monozyten zeigten letztlich eine ONOO--abhängige Internalisierung von CD40 von der Plasmamembran ins Zytoplasma der Zellen, die durch Methyl-β-Cyclodextrin verhindert wurde. Dieser posttranskriptionelle Mechanismus könnte Endothelzellen u. a. vor einer Initiation und Progression der Arteriosklerose durch Kontakt mit pro-inflammatorischen CD154-positiven T-Zellen oder Thrombozyten in Regionen mit verstärktem hämodynamischen Stress schützen.