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datestamp: 2000-09-19 00:00:00
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status_changed: 2012-08-14 15:00:27
type: doctoralThesis
metadata_visibility: show
creators_name: Wörth, Christian Christoph Theophil
title: Entwicklung eines Nachweis-Verfahrens für DNA-Addukte basierend auf Fluoreszenzderivatisierung und kapillarelektrophoretischer Trennung
title_en: Development of a method for the detection of DNA adducts based on fluorescence labeling and separation by capillary electrophoresis
ispublished: pub
subjects: ddc-610
divisions: i-850300
adv_faculty: af-14
keywords: DNA-AddukteDNA addukt , biomonitoring , capillary electrophoresis , derivatisation , laser-induced fluorescence detection
cterms_swd: Kapillarelektrophorese
cterms_swd: DNS-Schädigung
cterms_swd: Laserinduzierte Fluoreszenz
cterms_swd: Fluoreszenzmarkierung
cterms_swd: Biomonitoring
abstract: In dieser Arbeit wurde ein Verfahren zum Nachweis von modifizierten Nukleotiden (DNA-Addukten) basierend auf Fluoreszenzderivatisierung und kapillarelektrophoretischer Trennung mit Laser-induzierter Fluoreszenzdetektion entwickelt. Es wurde eine Derivatisierungsstrategie gefunden, die eine Kopplung von 2'-Desoxynukleosid- 3'-phosphaten aus enzymatischer DNA-Hydrolyse mit Fluoreszenzmarkern, die eine primäre Aminogruppe als Ankergruppe tragen, ohne Zwischenreinigung ermöglicht. Zur Trennung fluoreszenzmarkierter Nukleotide erwies sich die micellare elektro- kinetische Chromatographie in unbeschichteten fused-silica-Kapillaren und SDS als Micellenbildner als geeignet. Die entwickelte Methodik wurde zum Nachweis von 8-Oxo-dG, etheno-dA und 5-Methyl-dC aus definiert modifizierten Oligonukleotiden angewendet. In Kalbsthymus-DNA und DNA isoliert aus humanem Gewebe wurde 5-Methyl-dC direkt nachgewiesen und quantifiziert. Anhand der Analyse von mit Aristolochiasäure I in vitro-modifizierter Kalbsthymus-DNA gelang der simultane Nachweis unterschiedlicher DNA-Addukt-Klassen. Die entwickelte Methodik ermöglicht die Verwendung von DNA-Addukten als Biomarker genotoxischer Substanzen in  molekular-epidemiologischen Studien. 
abstract_translated_text: This work describes the development of an analytical method for the detection of DNA adducts based on fluorescence labeling and separation via capillary  electrophoresis. A labeling method was developed for the coupling of a  fluorescent dye with a primary aminofunction to the 3'-phosphate-group of deoxynucleotides, obtained by enzymatical digestion of DNA. A capillary electrophoretic separation was developed using SDS as micelles and uncoated fused-silica capillaries. The method was used for the detection of 8-Oxo-dG, etheno-dA and 5-Methyl-dC in modified oligonucleotides. 5-Methyl-dC was also detected and quantified in calf thymus DNA and DNA isolated from human tissue. The analysis of in vitro incubated calf thymus DNA with aristolochic acid I showed simutanous detection of alkylated and bulky DNA modifications. The method described enables the use of DNA adducts as bioamrkers for genotoxic compounds in molecular-epidemiologic studies.
abstract_translated_lang: eng
class_scheme: mesh
date: 2000
date_type: published
id_scheme: DOI
id_number: 10.11588/heidok.00001076
ppn_swb: 1643160648
own_urn: urn:nbn:de:bsz:16-opus-10763
date_accepted: 2000-08-03
advisor: HASH(0x561a62820d20)
language: ger
bibsort: WORTHCHRISENTWICKLUN2000
full_text_status: public
citation:   Wörth, Christian Christoph Theophil  (2000) Entwicklung eines Nachweis-Verfahrens für DNA-Addukte basierend auf Fluoreszenzderivatisierung und kapillarelektrophoretischer Trennung.  [Dissertation]     
document_url: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/1076/1/diss1.pdf