title: Developing novel strategies for oncolytic adenovirus therapy by host cell gene expression profiling and arming with therapeutic antibodies
creator: Dorer, Dominik
subject: 570
subject: 570 Life sciences
description: Die virale Onkolyse oder Virotherapie ist ein vielversprechender Ansatz zur Behandlung von Krebserkrankungen und wurde unter anderem klinisch getestet für onkolytische Adenoviren. Jedoch schwankt die therapeutische Wirksamkeit von Fall zu Fall, was daran liegen könnte, dass Krebszellen nicht die natürlichen Wirtszellen von Adenoviren sind. Ziel meiner Doktorarbeit war es Adenovirus 5 Infektionen in ihrem natürlichen Umfeld primärer Bronchialepithelzellen und verschiedener Krebszellen zu untersuchen, um Gene und zelluläre Signalwege zu finden, die einen Einfluss auf die adenovirale Replikation haben. Unter anderem konnte ich zeigen, dass in Bronchialepithelzellen die frühe virale Genexpression und DNA Replikation sehr schnell einsetzt, verbunden mit einer hohen Zytotoxizität. Dagegen war die frühe virale Genexpression als auch die DNA Replikation in zwei Melanomzelllinien stark verlangsamt, verbunden mit einer geringen Zytotoxizität. Genexpressionsanalysen mittels Microarray in infizierten Bronchialepithelzellen und jener Melanomzelllinien konnten zeigen, dass in den jeweiligen Zelltypen unterschiedliche Expressionsmuster einzelner Gene und zellulärer Signalwege vorlagen. Der am stärksten beeinflusste Signalweg reguliert den Eintritt in die S-Phase des Zellzyklus und war in den primären Bronchialepithelzellen aktiviert, aber nicht in den Melanomzelllinien. Anhand der Daten konnte eine Strategie zur verbesserten Onkolyse in einzelnen Melanomzelllinien entwickelt werden. Dafür wurden Adenovirus infizierte Melanomzellen zusätzlich mit dem Chemotherapeutikum Temozolomid behandelt. Ein weiteres Ziel meiner Arbeit war es, die Wirksamkeit onkolytischer Adenoviren durch die Expression von therapeutischen Antikörpern zu verbessern. Dafür habe ich tumorspezifische Adenoviren mit einem rekombinanten „single-chain“ Antikörper-Gen ausgerüstet. Die Antikörper erkennen das Tumor-assoziierte karzinoembryonale Antigen und verfügen außerdem über die Effektordomäne des Typ G Immunglobulins 2a, um eine Antikörper vermittelte Immunantwort gegen Krebszellen zu richten. Zuerst wurden verschiedene Expressionskonstrukte für eine optimale Antikörperproduktion mit dem adenoviralen „major late promoter“ getestet. Dabei wurden zwei effiziente Expressionskonstrukte identifziert, die sogenannte „internal ribosomal entry site“ und ein Spleiß-Akzeptor des humanen Adenovirus 40. Anschließend wurden die rekombinant hergestellten Antikörper im Western Blot, ELISA und mittels Durchflusszytometrie auf ihre Funktionalität geprüft. Eine erfolgreiche Antikörper-Antigen Reaktion konnte in-vitro als auch anhand lebender Tumorzellen gezeigt werden.
date: 2011
type: Dissertation
type: info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
type: NonPeerReviewed
format: application/pdf
identifier: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserverhttps://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/11844/1/Dissertation_Dominik_Dorer.pdf
identifier: DOI:10.11588/heidok.00011844
identifier: urn:nbn:de:bsz:16-opus-118441
identifier:   Dorer, Dominik  (2011) Developing novel strategies for oncolytic adenovirus therapy by host cell gene expression profiling and arming with therapeutic antibodies.  [Dissertation]     
relation: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/11844/
rights: info:eu-repo/semantics/openAccess
rights: http://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/help/license_urhg.html
language: eng