%0 Generic
%A Holzinger, Dana
%D 2012
%F heidok:13236
%K Oropharynx , virale RNA Muster , E6*II E1^E4 E1C L1 Transkripte , p16 pRb Cyclin D1 p53oropharynx , viral RNA transcription patterns , E6*II E1^E4 E1C L1 transcripts , p16 pRb Cyclin D1 p53
%R 10.11588/heidok.00013236
%T Virale und zelluläre Faktoren zur Identifizierung HPV-assoziierter Oropharynxkarzinome
%U https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/13236/
%X Bestimmte onkogene Typen der humanen Papillomviren (HPV), v. a. der häufigste HPV-Typ 16, sowie potentiell andere weniger prävalente ‚Hochrisiko’-HPV-Typen sind kausal mit einer Untergruppe von Kopf-Hals Tumoren (HNSCC) assoziiert. Unter den HNSCC erscheinen insbesondere die HPV16-positiven Karzinome des Oropharynx (OPSCC) heterogen hinsichtlich der Viruslast, der onkogenen Virus¬aktivität und dem klinischen Verhalten.  In der vorliegenden Promotionsarbeit wurde die Assoziation viraler und zellulärer Marker und der aktiven HPV-Beteiligung beim OPSCC analysiert. Die Analysen beruhten auf den Markern HPV16 DNA, Viruslast, onkogene RNA (E6*II und E6*I Transkripte), virale RNA-Muster und den zellulären Proteinen p16INK4a, pRb, Cyclin D1 and p53. Des Weiteren wurden die Marker in Zusammenhang mit klinischen Parametern und dem Überleben der Patienten ausgewertet, um so diejenigen Marker zu definieren, die das höchste diagnostische und prognostische Potential aufwiesen, Tumoren mit aktiver HPV-Beteiligung zu identifizieren. Zunächst wurden 199 frisch-gefrorene OPSCC auf HPV DNA mittels BSGP5+/6+-PCR/Multiplex HPV Genotypisierung analysiert und anschließend die HPV16 Viruslast mittels HPV16 real-time PCR quantifiziert. Die gespleißten HPV16 Transkripte E6*II und E6*I (226^526) für die Analyse der onkogenen RNA und die Transkripte E1C (880^2582), E1^E4 (880^3358) und L1 (3632^5639) für die Analyse der viralen RNA-Muster wurden durch einen NASBA/Luminex Assay detektiert. Die zellulären Proteine wurden mittels Immun¬histo¬chemie an Gewebechips analysiert, die von 188 Formalin-fixierten und in Paraffin-eingebetteten (FFPE) derselben OPSCC generiert wurden. Die HPV16-Prävalenz (HPV+) betrug insgesamt 49% (97/199). 33/97 (34%) hatten eine hohe (HPVhigh) und 64/97 (66%) OPSCC hatten eine niedrige (HPVlow) Viruslast. Bei 32/33 (97%) HPVhigh und auch bei 16/64 (25%) HPVlow Tumoren waren die onkogenen RNA-Transkripte vorhanden (RNA+). Die viralen RNA-Muster (RNA+/CxCa+) wurden bei 31/33 (94%) HPVhigh und bei 40/48 (83%) RNA+ Tumoren nachgewiesen. Demzufolge lag die Prävalenz von aktivem HPV16 (RNA+/CxCa+) in dieser OPSCC Kohorte bei nur 20% (40/196). Die zellulären Proteinexpressions-Muster der RNA+/CxCa+ OPSCC unterschieden sich signifikant von den HPV— und den RNA— Tumoren. RNA+/CxCa+ war assoziiert mit hohen p16INK4a- und niedrigen pRb-, Cyclin D1- und p53-Expressionsleveln. Nur 31/39 (80%) RNA+/CxCa+, aber auch 23/137 (17%) HPV— oder RNA— Tumoren überexprimierten p16INK4a. Die stärkste Assoziation für RNA+/CxCa+ (OR=59,1; 95%KI=15,3-228,8; p<0,0001) und die besten prädiktiven Werte (Sensitivität 79%, Spezifität 94%, PPV 79%, NPV 94%) wurden für die Kombination von hohen p16INK4a- und niedrigen pRb-Expressionsleveln gefunden.  Von allen untersuchten viralen und zellulären Markern oder Markerkombinationen, zeigte RNA+/CxCa+ die höchste Sensitivität und gleichzeitig das geringste Risiko am OPSCC zu versterben (HR=0,31; 95%KI=0,14–0,68; p=0,01) und wurde daher als bester Marker für die Identifizierung der OPSCC mit aktiver HPV-Beteiligung vorgeschlagen.  Die klinische Heterogenität unter den HPV16 DNA-positiven OPSCC kann durch die umfangreiche Bestimmung der Viruslast und der Expression der viralen RNA-Muster aufgedeckt werden. Dagegen sollte die Verwendung von zellulären Surrogatmarkern beim OPSCC nicht allein auf der Expression von p16INK4a basieren. Sofern nur FFPE-Material zur Verfügung steht, ist die Markerkombination p16INK4a-hoch/pRb-niedrig, auch in Verbindung mit dem HPV16 DNA-Status, bestens geeignet, einen RNA+/CxCa+ Tumor mit biologisch aktivem HPV16 zu identifizieren, der eindeutig eine eigene OPSCC-Entität mit einem besserem Überleben darstellt.