TY  - GEN
ID  - heidok1395
AV  - public
UR  - https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/1395/
KW  - single chain
KW  -  Egp2
Y1  - 2000///
A1  - Kürschner, Timo
TI  - Konstruktion und Screening von Antikörperbibliotheken gegen Oberflächenantigene
N2  - Die Phagedisplaytechnologie ist in den letzten Jahren eine der wichtigsten Methoden zur Gewinnung von humanen monoklonalen Antikörpern geworden.  Die Herstellung von großen Antikörperbibliotheken mit Hilfe dieser Technik ist Voraussetzung für die erfolgreiche Selektion von Antikörpern gegen die unterschiedlichsten Antigene. Ziel der vorliegenden Arbeit war es sowohl große Antikörperbibliotheken erfolgreich Antikörper gegen Oberflächenantigene zu selektionieren, als auch die Methoden zu deren Bau zu verfeinern. Aus einer bestehenden Antikörperbibliothek, die aus den peripheren Blutlymphozyten von fünfzig Spendern aufgebaut worden war, wurden scFv-Fragmente gegen das HbsAg des HBV-Viruses isoliert. Die Fragmente erkennen sowohl rekombinant hergestelltes HbsAg, als auch natives auf dem Virus selbst. Diese scFv-Fragmente werden zudem in besonders großen Mengen in E.coli produziert, so daß das Framework für den Aufbau einer synthetischen Bibliothek geeignet ist. Mit einem neuen sensitiveren Phagen-ELISA auf Chemolumineszenzbasis wurden die Detektionsgrenze nach unten verschoben. Dadurch ist es möglich bereits 106 gebundene Phagen zu detektieren. Dieses Verfahren ist besonders sinnvoll einzusetzen, wenn nicht genügend Antikörper oder Antigen vorhanden ist und hat großes diagnostisches Potential bei gering exprimierten Zelloberflächenantigenen. Durch verschiedene methodische Änderungen bei der Amplifikation der humanen variablen Genregionen und bei der Herstellung von Phagedisplaybibliotheken gelang es, die Qualität solcher Bibliotheken zu steigern. Außerdem wurden durch umfangreiche Primerspezifitätstests die Grundlagen für klassenspezifische Patientenbibliotheken gelegt. Desweiteren wurde unter Verwendung von neu entworfenen Primern eine universelle IgM Bibliothek hergestellt und diese erfolgreich mit einem Zelloberflächenantigen (Egp2) gescreent. 
ER  -