title: Charakterisierung und Optimierung von CD276 spezifischen Peptiden mittels Display Techniken
creator: Marr, Annabell
description: In dieser Arbeit sollten spezifisch bindende Peptide gegen die extrazelluläre Domäne der Zielstruktur CD276, ein in verschiedenen Tumorarten überexprimiertes Membranprotein, identifiziert werden. Tumor spezifische Peptide finden in der Bildgebung sowie zielgerichteten Therapien Anwendung. Die hier identifizierten Peptide sollen als Leitstrukturen für neue Tracer zum Einsatz in der Bildgebung dienen.     Die Selektion der Peptide erfolgte mit Hilfe der Phagenbibliothek Ph.D12 sowie selbst hergestellten Peptidbibliotheken basierend auf Miniprotein-Scaffolds und zwei verschiedenen Display Systemen, dem Phage- und Ribosome Display. Peptide wurden anschließend durch Fmoc-Festphasensynthese hergestellt, wenn nötig entsprechend gefaltet sowie mit 125I radiomarkiert und in Kinetik-, Kompetitions- sowie Internalisierungsstudien charakterisiert. Vor dem Einsatz in vivo an Tumor tragenden Nacktmäusen wurden zudem Stabilitätsstudien in Serum vorgenommen.  Das Peptid CD276.11, welches der Ph.D.12 Bibliothek entstammt und mit Phage Display nach vier Panningrunden isoliert wurde, zeigte eine mit der CD276 Expression korrelierende Bindungsstärke an fünf verschiedenen Tumorzelllinien. Kompetitionsexperimente mit radiomarkiertem Peptid und unmarkiertem Peptid wiesen auf eine spezifische Bindung an CD276 hin. Ein IC50 Wert von 750 nM konnte ermittelt werden. Stabilitätsexperimente in humanem Serum ergaben eine t1/2 von fünf Minuten. Der Versuch der Stabilisierung sowie Fragmentanalysen führten zu dem Schluss, dass es sich bei dem in der Serumanalyse entstehenden Metaboliten um einen 125I Tyrosinrest handelte. Diese Vermutung konnte durch Bindungsstudien von markiertem Tyrosin auf Zellen sowie Kompetitionsversuche mit 125I-CD276 und unmarkiertem Tyrosin bestätigt werden.   Ein weiteres nach vier Panningrunden mit der Ph.D.12 Bibliothek und dem Phage Display System identifiziertes Peptid, das PDGFR-P1, wurde bereits zuvor in zwei unabhängigen Pannings gegen das Membranprotein PDGFRβ isoliert. Ziel war es hier, die Bindung an beide Zielproteine zu bestätigen und die Affinität des Peptids zu steigern. Mittels Peptid-Arrays konnte gezeigt werden, dass das Peptid sowohl an CD276 als auch an PDGFRβ, nicht aber an das Kontrollprotein FGFR band. Durch gezielten Austausch einzelner Aminosäuren sowie einer Fragmentanalyse auf dem Peptid-Array konnte ein Peptid G2 mit erhöhter Affinität identifiziert werden, welches anschließend in vitro sowie in vivo charakterisiert wurde.
date: 2012-11
type: Dissertation
type: info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
type: NonPeerReviewed
format: application/pdf
identifier: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserverhttps://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/14038/1/Annabell%20Marr_Dissertation_Ver%C3%B6ffentlichung.pdf
identifier: DOI:10.11588/heidok.00014038
identifier: urn:nbn:de:bsz:16-heidok-140380
identifier:   Marr, Annabell  (2012) Charakterisierung und Optimierung von CD276 spezifischen Peptiden mittels Display Techniken.  [Dissertation]     
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rights: info:eu-repo/semantics/openAccess
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language: ger