TY  - GEN
UR  - https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/15200/
Y1  - 2013///
ID  - heidok15200
AV  - public
N2  - Die hepatozelluläre Steatose ist die häufigste Lebererkrankung in westlichen
Industrieländern und geht mit einer erhöhten Inzidenz für Steatohepatitis, Leberzirrhose
und hepatozelluläre Karzinome einher. Lipidtropfen-assoziierte Proteine der PAT-Familie
(Perilipin, Adipophilin, TIP47 und MLDP) spielen eine maßgebliche Rolle in der
Biogenese, Reifung und Degradation von Lipidtropfen. Im Rahmen dieser Dissertation
wurde gezeigt, dass Perilipin eine chronische Steatose in vivo und in vitro kennzeichnet und
dadurch das Endstadium der Lipidtropfenreifung charakterisiert. In situ in einem Kollektiv
von über 30 Leberproben unterschiedlichen Verfettungsgrads wurden die Perilipin-
Isoformen A, B und C jeweils zusammen nachgewiesen und über Massenspektrometrie
verifiziert; es bestand keine signifikante differentielle Expression der Perilipin-Isoformen.
In einem weiteren Kollektiv von über 80 Leberbiopsien von Patienten mit einer akuten
bzw. chronischen Leberzellschädigung unterschiedlicher Genese wurden Adipophilin und
Perilipin unabhängig von Ätiologie, Geschlecht und Alter bei chronischer
Leberparenchymverfettung gebildet. Bei akuter Leberparenchymverfettung wie bei
ursprünglich nicht-verfetteten Transplantatlebern wurden TIP47, MLDP und Adipophilin
verstärkt gebildet bzw. an Lipidtropfen rekrutiert; nicht jedoch Perilipin. In
Übereinstimmung mit in situ Beobachtungen wurden TIP47, MLDP, und Adipophilin,
nicht jedoch Perilipin, in hepatozytären Kurzzeitsteatose-Modellen in Kulturzellen der
Linien Huh7, HepG2, Hep3B, und PLC unter Verwendung steatogener Substanzen wie
BSA-gekoppelter Ölsäure, Cholesterin, LDL, PPAR?-Agonisten, oder bei Hypoxie
induziert. Perilipin wurde erst bei Langzeitbehandlung von Zellen von über 10 Tagen,
insbesondere mit kombinierter Zugabe von DMSO mit BSA-gekoppelter Ölsäure oder einer
Mischung aus PPAR?-Agonisten, Biotin, IBMX und Hormonen wie L-Thyroxin, Insulin,
und Dexamethason induziert. Die Lipidtropfenreifung ging mit einer sequentiellen
Assoziation der ePAT-Proteine TIP47 und MLDP und der cPAT-Proteine Adipophilin und
Perilipin mit Lipidtropfen einher. Neben den Transkriptionsfaktoren PPAR? und PPAR?
zeigten auch C/EBP? und SREBP1 zunehmende Proteinmengen in behandelten und
unbehandelten Zellen, was auf kombinierte Faktoren für eine Perilipin-Induktion schließen
lässt. In Kulturzellen waren für die Induktion von Perilipin eine niedrige Proliferationsrate
und ein hoher Differenzierungsgrad der Zellen wichtig. In Kombinationen von
Langzeitsteatose-Modellen mit einer Herunterregulation von Adipophilin und / oder TIP47,
ersetzte TIP47 fehlendes Adipophilin, MLDP fehlendes TIP47 und Adipophilin sowie Perilipin fehlendes Adipophilin. Die transiente Herunterregulation von Adipophilin oder
kombiniert TIP47 und Adipophilin in den Zellkulturen verursachte große Perilipin-positive
Lipidtropfen, die durch Lipidtropfenfusion entstanden, wie durch ?Live cell imaging?
gezeigt werden konnte. Möglicherweise sind Lipidtropfenfusionen Ausdruck einer
verminderten Lipidtropfenstabilität bei Fehlen von PAT-Proteinen, da Kontrollzellen dieses
Phänomen nicht zeigten. Zellen mit vermindertem Adipophilin bildeten zwar mehr
Perilipin, akkumulierten jedoch trotzdem weniger Triacylglyceride als Zellen mit
verminderter TIP47-Menge oder Kontrollzellen. Demzufolge stellt Adipophilin einen
entscheidenden Faktor in der intrahepatischen Lipidakkumulation dar. Der Einfluss von
Perilipin konnte noch nicht abschließend geklärt werden. Perilipin könnte jedoch sogar
einen positiven Einfluss bei Patienten mit metabolischem Syndrom haben, da Perilipin
bekanntermaßen über die Langzeitspeicherung von Triacylglyceriden die Lipotoxizität
vermindert.
Antikörper gegen die PAT-Proteine TIP47, MLDP, Adipophilin und Perilipin sind
hilfreiche diagnostische Marker für die Definition nicht nur steatotischer
Lebererkrankungen, sondern auch akuter und chronischer Leberschäden. Langfristig sind
therapeutische Ansätze, insbesondere mit dem cPAT-Protein Adipophilin denkbar, so wie
es im Rahmen dieser Arbeit in Zellkulturmodellen und von anderen Autoren in der Maus
gezeigt werden konnte.
TI  - Perilipin-Induktion und Dynamik der Expression Lipidtropfen-assoziierter Proteine in menschlicher Leberparenchymverfettung und in Steatose-Zellkulturmodellen
A1  - Pawella, Lena Maria
ER  -