title: 4Pi-RESOLFT nanoscopy
creator: Böhm, Ulrike
subject: ddc-500
subject: 500 Natural sciences and mathematics
subject: ddc-530
subject: 530 Physics
subject: ddc-570
subject: 570 Life sciences
description: Die Vergrößerung des Öffnungswinkels entlang des optischen Achse eines Mikroskopes durch die kohärente Überlagerung der Foki zweier sich gegenüberstehender Objektive (4Pi-Anordnung) ermöglicht die Erzeugung der lichteffizientesten und schärftesten Punktbildfunktionen, um die dreidimensionale Auflösung in der Fernfeldmikrokopie weit unter die Beugungsgrenze zu bringen. Um bei diesem Verfahren jedoch möglichst eindeutige Aufnahmen zu erhalten, müssen die detektierten Signale, von Hintergrundsignalen über- und unterhalb der Fokalebene getrennt werden. Bisher wurden deshalb hauptsächlich nur fixierte Proben untersucht, da deren Aufnahmebedingungen sehr gut kontrolliert werden können.   In dieser Arbeit stelle ich ein hochauflösendes 4Pi-Verfahren vor, das Aufnahmen von lebenden Zellen mit vernachlässigbarem Hintergrundsignal und Lichtschäden ermöglicht. Basierend auf RESOLFT Mikroskopie mit schaltbaren fluoreszierenden Proteinen und Zweiphotonenaktivierung und in Verbindung mit modifizierten Probenprotokollen und optimierter Optik zur Vorbeugung von Aberrationen, ermöglicht es einen robusten Zugang zu dicht gepackten, entlang der optischen Achse ausgedehnten, zellulären Regionen, die bislang weitestgehend vermieden wurden. Die Auflösung und die Signalqualität der Aufnahmen konnten zudem weiter durch die zeitliche Auswertung des Auslesesignals, auf Grund der hohen molekularen Sensitivität der entwickelten Methode auf lokale Schaltraten der Proteine, verbessert werden.
date: 2016
type: Dissertation
type: info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
type: NonPeerReviewed
format: application/pdf
identifier: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserverhttps://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/20200/1/Doktorarbeit-UlrikeBoehmv3.pdf
identifier: DOI:10.11588/heidok.00020200
identifier: urn:nbn:de:bsz:16-heidok-202002
identifier:   Böhm, Ulrike  (2016) 4Pi-RESOLFT nanoscopy.  [Dissertation]     
relation: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/20200/
rights: info:eu-repo/semantics/openAccess
rights: http://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/help/license_urhg.html
language: eng