TY  - GEN
TI  - Charakterisierung komplexer Lipidome mittels Reverser Phase-UPLC-HRMS/Tandemmassenspektrometrie
Y1  - 2018///
AV  - public
ID  - heidok24787
UR  - https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/24787/
A1  - Wozny, Katharina
N2  - In dieser Arbeit wurden detaillierte Untersuchungen zu generellen Aspekten der
massenspektrometrischen Lipidanalytik durchgeführt. Dies umfasste das Ermitteln von für
die Quantifizierung geeigneten Konzentrationsbereichen in komplexen Mischungen, die
Untersuchung des Lipid-Ionisierungsverhaltens in Zwei-Komponenten-Mischungen, den
Vergleich der Effizienz gängiger Lipidextraktionsverfahren und Untersuchungen zu Nicht-
Lipid-Kontaminanten in RP-UPLC-MS-Analysen. Unter der Bedingung des Vorliegens einer
direkten Proportionalität waren Quantifizierungen in einem Konzentrationsbereich von 1 nM
bis 30 ?M pro Lipidklasse möglich. Es wurden Hinweise für mögliche Abweichungen von der
direkten Proportionalität abhängig von Flussrate gefunden. Die Untersuchungen der
Zwei-Komponenten-Mischungen lieferten keine Hinweise auf eine intermolekulare
Beeinflussung der Ionisierung. Die Verwendung von Glas im Vergleich zu Plastik lieferte
keine signifikanten Unterschiede des Kontaminanten-Gehalts. In dieser Arbeit durchgeführte
vergleichende Untersuchungen zur Spezifität von verschiedenen gemischten
Full-MS/Fragmentierungsscans zeigten, dass Full-MS/AIF-Scans für erste
Charakterisierungen von komplexen Proben geeignet sind und bei chemisch reinen Proben
ohne Koelution von Spezies Ergebnisse qualitativ gleichwertig zu denen von
targeted-MS/MS-Scans liefern. Die Software MassMap hat sich aufgrund der Möglichkeit
einer benutzerfreundlichen Bewertung identifizierter Signale als geeignetes Software-Tool für
die Auswertung von Datensätzen mit unterschiedlichen Scanmethoden erwiesen. Des
Weiteren wurde eine neuartige Methode für die dGPL-Regioisomer-Analyse mit Hilfe von
UPLC-targeted-MS/MS im Negativmodus etabliert. Hiermit konnten die Regioisomer-SICs
mit Hilfe eines dedizierten Auswerte-Moduls der Software MassMap rekonstruiert und die
Regioisomer-Anteile in Mischungen ermittelt werden. In dieser Arbeit wurden außerdem
E. coli-Lipidomveränderungen in Abhängigkeit von der Wachstumszeit und die Wirkung der
Roemerin-Behandlung auf E. coli K12 TB1 untersucht. PE-Spezies und PG-Spezies mit
gleicher Fettsäurezusammensetzung zeigten ein paralleles Verhalten der
Speziesanteiländerungen mit zunehmender Wachstumszeit. Innerhalb der exponentiellen
Phase wurden fast keine signifikanten Speziesanteiländerungen gefunden, während
zwischen der exponentiellen und der stationären Phase eine Vielzahl signifikanter
Unterschiede gefunden wurde. Roemerin wies keinen rein bakteriostatischen Effekt auf
E. coli auf. Bei der Behandlung von B. subtilis 168 mit Berberin, Boldin und Roemerin wurde
nur für Roemerin eine antibakterielle Aktivität gefunden, die mit signifikanten metabolischen
und morphologischen Veränderungen der Zellen einherging.
ER  -