title: Die Rolle der Phosphorylierung von FADD/MORT1
creator: Volkland, Jörg
subject: 570
subject: 570 Life sciences
description: Das Adaptormolekül FADD/MORT1 ist essentiell für die Signaltransduktion der Todesrezeptoren CD95, TNF-RI, DR3, DR4 und DR5, spielt eine wichtige Rolle beim Wiedereintritt von ruhenden T Zellen in den Zellzyklus und wird an Serinresten phosphoryliert. Untersuchungen mit dem Phosphorylierungs-spezifischen Antikörper 1C4 wiesen Serin 194 als einzige Phosphorylierungsstelle in FADD nach. Zellzyklusarreste und Elutrationen ergaben, daß die Phosphorylierung Zellzyklus-abhängig in G2/M erfolgt. In vitro Kinase Tests und Immunpräzipitationen führten zur Detektion einer ca. 70 kDa großen Kinase, die mit der C-terminalen Hälfte der DED von FADD assoziiert. Die Kinase selbst lokalisiert in der Nukleusfraktion. Experimente mit T Zellen aus C-FADD transgenen Mäusen und C-FADD stabil exprimierenden Fibroblasten hatten gezeigt, daß C-FADD die Proliferation inhibieren kann. Um zu testen, ob die Phosphorylierung von C-FADD diesen Zellzyklusarrest bewirkt, wurden die Brustkarzinomzellinie MCF-7 und die spontan immortalisierte epitheliale Brustzellinie MCF-10A mit den adenoviralen Vektoren AdV-C-FADD Wildtyp, AdV-C-FADD S194A und AdV-C-FADD S194E infiziert. Die Expression des Wildtyps führte nur in der Zellinie MCF-10A zu einem Zellzyklusarrest in G2/M, was mit der Phosphorylierung von FADD in G2/M korrelierte. Auch die adenovirale Transduktion von naiven CAR transgenen T Zellen mit FADD Wildtyp und Punktmutanten ergab, daß der Proliferationsarrest von der Phosphorylierung des Wildtyp Proteins abhängig ist. Um die Rolle von FADD in der DISC Bildung von CD95 Typ I Zellen zu untersuchen, wurde in BJAB C-FADD Transfektanten Apoptose mittels CD95 induziert. Während im DISC von C-FADD S194A Transfektanten nach Stimulation von CD95 kaum endogenes FADD und keine Caspase-8 gefunden werden konnte, waren bei C-FADD S194E endogenes FADD und Caspase-8 schon mit dem unstimulierten Rezeptor assoziiert. Untersuchungen mit den Transfektanten zeigten, daß C-FADD Wildtyp und S194E in der Lage sind, mit Aktin zu assoziieren. Die Behandlung von Zellen mit dem Kinaseninhibitor Staurosporin verhinderte die Bildung des DISC gänzlich und reduzierte die Phosphorylierung von FADD, was darauf hindeutet, daß die Phosphorylierung von FADD für die Signaltransduktion des CD95 Rezeptors in Typ I Zellen notwendig ist. 
date: 2002
type: Dissertation
type: info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
type: NonPeerReviewed
format: application/pdf
identifier: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserverhttps://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/3099/1/Dissertation.pdf
identifier: DOI:10.11588/heidok.00003099
identifier: urn:nbn:de:bsz:16-opus-30995
identifier:   Volkland, Jörg  (2002) Die Rolle der Phosphorylierung von FADD/MORT1.  [Dissertation]     
relation: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/3099/
rights: info:eu-repo/semantics/openAccess
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language: ger