%0 Generic
%A Kwoczynski, Simona
%D 2002
%F heidok:3338
%K Histonkinase , Histonphosphorylierungchromatin , Drosophila , transcriptional regulation , histone kinase , histone phosphorylation
%R 10.11588/heidok.00003338
%T Funktionale Charakterisierung der Kinase-Aktivität des Transkriptionskoaktivators TAFII250 in Drosophila melanogaster
%U https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/3338/
%X TAFII250 („TBP associated factor 250“) ist die größte und funktional vielfältigste Unter-einheit des generellen Transkriptionsfaktors TFIID. Indem TAFII250 sowohl mit TBP, als auch mit nahezu allen TAFII-Untereinheiten interagiert, nimmt es eine zentrale Stellung inner-halb des TFIID-Komplexes ein. Zudem ist TAFII250 an der Erkennung der Initiator-Promotorsequenz beteiligt, kontaktiert Enhancer-gebundene Trankriptionsaktivatoren sowie verschiedene Komponenten der generellen Transkriptionsmaschinerie (GTM) und nimmt so eine zentrale Funktion bei der Core-Promotorerkennung und als Koaktivator ein. Insbesondere ist TAFII250 an der Aktivierung der Transkription von Zielgenen beteiligt, deren Genprodukte in essentielle biologische Prozesse, wie der Zellzyklusregulation und dem Zellwachstum, involviert sind. Ferner wurde gezeigt, daß TAFII250 über verschiedene enzy-matische Aktivitäten verfügt und neben einzelnen Komponenten der GTM auch Histone modifiziert. Im Rahmen dieser Arbeit konnte gezeigt werden, daß TAFII250 das Histon H2B phos-phoryliert. Dies läßt die Hypothese zu, daß die TAFII250-vermittelte Phosphorylierung von H2B an der Transkriptionsaktivierung beteiligt ist. Weitere Ziele der vorliegenden Arbeit waren, die H2B-spezifische Kinase-Aktivität funktional zu charakterisieren und Hinweise für ihre Beteiligung an der Transkriptionsaktivierung zu erhalten. Unter Verwendung verschiedener Histon H2B-Peptidmutanten konnte gezeigt werden, daß TAFII250 Serin 33 in H2B phosphoryliert. Dieses Ergebnis konnte mit Hilfe eines in dieser Arbeit generierten a-H2B- Phosphoserin-33-spezifischen Antikörpers bestätigt werden. Ferner konnten die Kinase-aktiven Domänen des TAFII250-Proteins auf zwei distinkte Bereiche eingegrenzt werden: eine NH2-terminale Kinase (NTK) und eine COOH-terminale Kinase (CTK). Beide Domänen sind sowohl auto- als auch transkatalytisch aktiv, wobei die Histonphosphorylierung von der CTK katalysiert wird. Des weiteren wurde gezeigt, daß etwa 600 der COOH-terminalen Aminosäuren der CTK für die Histonphosphorylierung essentiell sind. Durch computergestützte Analysen der TAFII250-Aminosäuresequenz konnten kata-lytisch aktive und insgesamt drei potentielle ATP-bindende Sequenzmotive innerhalb der NTK und CTK-Domänen identifiziert werden. Anhand dieser Ergebnisse sollte es möglich sein Kinase-inaktive Formen des TAFII250-Proteins herzustellen. Um einen Hinweis darauf zu erhalten, ob die CTK in vivo in den Prozeß der Transkriptions-aktivierung involviert ist, wurde mittels in situ-Hybridisierung die snail (sna)-Transkription in Ganzpräparaten von Drosophila Embryonen untersucht, die eine homozygot letale CTK-Deletionsmutante des TAFII250-Proteins enthalten. Die sna-Expression ist in den Embryonen deutlich reduziert, woraus abgeleitet werden kann, daß die CTK an der TAFII250- abhängigen Transkriptionsaktivierung beteiligt ist. Die Ergebnisse dieser Arbeit stellen somit einen Ausgangspunkt dar, die molekularen Mechanismen der TAFII250-abhängigen Transkriptionsaktivierung am Chromatin in vitro und in vivo zu entschlüsseln.