TY  - GEN
ID  - heidok5311
Y1  - 2005///
TI  - Biochemical Analysis of SNARE Protein Interactions ? Role of Transmembrane Domain
AV  - public
N2  - SNARE (soluble NSF attachment protein receptor) Proteine umfassen verschiedene Familien von Proteinen, welche in Eukaryonten von der Hefe bis hin zum Menschen vorkommen. Sie sind für die Membranfusion bei zellulären Prozessen, wie Vesikeltransport, Neurotransmitterausschüttung oder Hefevakuolenfusion, unerlässlich. Vor der Membranfusion assemblieren SNARE zu einem stabilen Komplex. Dies beginnt nach dem ?zipper? Modell am zytoplasmatischen Bereich und setzt sich dann zu der Transmembrandomäne (TMD) fort. Bisher deuten Ergebnisse darauf hin, dass die TMD von SNARE Proteinen nicht nur deren Verankerung in der Membran übernimmt, sondern auch für die Funktion wichtig ist. In dieser Arbeit habe ich die Rolle der TMD bei der Assemblierung des neuronalen SNARE Proteins Synaptobrevin II und der SNAREs aus Hefevakuolen erforscht. Andere Arbeitsgruppen zeigten, dass die Homodimerisierung des bei der Neurotransmitterausschüttung beteiligten Synaptobrevin II von dessen TMD abhängt. Hier wurde gezeigt, dass diese Assemblierung in Anwesenheit von Harnstoff besser erfolgt, als ohne ihn. Dabei wurde durch CD-Messungen nachgewiesen, dass Harnstoff die ?-helikale Struktur der TMD nicht beeinflusst. Die Charakterisierung der TMD bei der Assemblierung von SNARE Proteinen während der Hefevakuolenfusion erfolgte unter nativen Bedingungen. Mit Saccharosegradienten wurde gezeigt, dass das vakuoläre SNARE Vam3p Homodimere ausbildet und dies deutlich von der TMD abhängt, während dies bei Selbstinteraktionen von Nyv1p und Vti1p nicht der Fall ist. Die SNARE Proteine Vam7p und Ykt6p, ohne TMD, lagen überwiegend als Monomere vor. Die in vitro Assemblierung der vakuolären SNARE Proteine Vam3p, Nyv1p, Vam7p und Vti1p, wurde durch Saccharosegradient mit anschließender co-Immunopräzipitation untersucht. Der Komplex wurde spezifisch durch Sec18p und Sec17p in Anwesenheit von ATP getrennt, wie dies in Hefe der Fall ist, und somit dessen biologische Relevanz verdeutlicht. Die Ausbildung des Komplexes wird auch durch die TMD von Vam3p beeinflusst, da teilweise bei deren Nichtvorhandensein unspezifische Multimere entstehen. Bei der Untersuchung der Bildung des  zytoplasmatischen SNARE-Komplexes an Proteinen ohne TMD wurden im Vergleich zu den Proteinen von voller Länge Multimere von höherer molekularer Masse nachgewiesen. Ein pentamerer SNARE Komplex mit Ykt6p konnte unter diesen experimentellen Bedingungen nicht nachgewiesen werden.
UR  - https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/5311/
A1  - Roy, Rana
ER  -