<> "The repository administrator has not yet configured an RDF license."^^ . <> . . "Structural Characterisation of the Catalytic Core of the Class III Adenylyl Cyclase Rv0386 from Mycobacterium tuberculosis"^^ . "Tuberkulose (TB) ist eine chronische Krankheit, an der ein Drittel der Weltbevölkerung infiziert ist. Mehrfachresistente Mycobacterium tuberculosis-Stämme sind entstanden, die durch bisher existierende Antibiotika nicht bekämpft werden können. Wird die Krankheit nicht behandelt, könnte sie sich unkontrolliert ausbreiten und zur Pandemie anwachsen. Es ist daher dringend geboten, neue Methoden zur Bekämpfung von Tuberkulose zu finden. Das Interesse an mycobakteriellen Adenylat-Zyklasen (Adenylyl Cyclases, ACs), die den universellen second messenger cAMP herstellen, ist groß, insbesondere weil regulatorische Prozesse, an denen cAMP beteiligt ist, lebenswichtig für dieses Pathogen zu sein scheinen. Man findet erhöhte cAMP Konzentrationen während der Infektion in den Phagosomen, und dies scheint die Bakterien vor ihrer Vernichtung zu bewahren. Die große Zahl von ACn bei M. tuberculosis legt nahe, daß das Pathogen die Fähigkeit hat, extra- und intrazelluläre Signale wahrzunehmen und mittels cAMP darauf zu reagieren. Diese Vorgänge sind von fundamentalem Interesse, Studie der involvierten Enzyme könnte aber direkt zur Entwicklung von Medikamenten und damit zu neuen Behandlungsmethoden führen. In dieser Studie wird die kristallographische Röntgenstruktur der katalytischen Domäne (cyclase homology domain, CHD) der Klasse III-Adenylatzyklase Rv0386 aus Mycobacterium tuberculosis untersucht. Rv0386 ist eine außergewöhnliche Adenylatzyklase, da sie sowohl ATP als auch GTP als Substrat verwenden kann. Bisher wurden Klasse III-ACs als gegenläufige Dimere (head-to-tail) gefunden. Im Gegensatz dazu zeigt die Struktur von Rv0386 CHD einem neuen, Kopf-Kopf homodimeren Zustand, in dem sich keine aktiven Zentren ausbilden. Dies erklärt auch die geringe Aktivität des Proteins in vitro. Die Kontaktfläche des Dimers ist mit 1497 Å 2 recht groß. Um diesen neuen Dimer hinsichtlich der Kristallisation abzuklären, wurden die Eigenschaften in Lösung mittels Kleinwinkelröntgenstreuung untersucht. Dabei konnte der Kopf-Kopf Dimer verfiziert werden. Um die Substraterkennung zu studieren, wurde hier ein Modell des aktiven Zustands erstellt. Gezeigt werden die ATP- und GTP bindenden Aminosäuren Asn106 und Gln57, die beide Substrate erkennen können, wenn die Seitenketten jeweils um 180° gedreht werden. Eine Diskussion der homologen AC-Strukturen zeigt, dass im Gegensatz zum üblicherweise identifizierten achtsträngigen beta-Faltblatt der Klasse III-ACs bei Rv0386 CHD beta-Strang beta5 fehlt. Bei den gegenläufigen Dimeren trägt beta5 zum Interface bei, was vermuten läßt, daß beta5 in Rv0386 beim Übergang vom inhibierten zum aktiven Zustand gebildet wird. Da beta5 zusätzlich das katalytische Asn106 trägt, kann diese Region als Aktivitätsschalter während der Interaktion der Monomere im katalytischen Dimer angesehen werden. Um vom inaktiven Dimer zum katalytisch aktiven Dimer zu gelangen, müsste man eines der Monomeren um 48,2° drehen und 16,8 Å entlang der Rotationsachse verschieben. Kristallisation wurde mit zusätzliche Substraten oder Inhibitoren versucht. Allerdings scheint der Kopf-Kopf Dimer von Rv0386 CHD so stabil zu sein, dass der gegenläufige Dimer des aktiven Zustands nicht gebildet wird, sogar nach dem Versuch, die Substrat-Bindungsstellen zu besetzen. Co-Faktor Mangan ist notwendig für die Katalyse von Rv0386 CHD in vitro. Unerwarteterweise wird in dieser Arbeit gezeigt, dass Mangan zusätzlich das Oligomerisierungsverhalten beeinflusst. In Gegenwart von Mn 2+ ist Rv0386 CHD ein Monomer, wie über Gel-Chromatographie, analytische Ultrazentrifugation und Kleinwinkelstreuung nachgewiesen. Versuche, den Monomer über Zugabe von Substrat-Analoga in den Dimer zu überführen, führte zu Kristallen, die jedoch für die Analyse noch weiter verbessert werden müssten."^^ . "2006" . . . . . . . . "Christina"^^ . "Pancevac"^^ . "Christina Pancevac"^^ . . . . . . "Structural Characterisation of the Catalytic Core of the Class III Adenylyl Cyclase Rv0386 from Mycobacterium tuberculosis (PDF)"^^ . . . "PhD_thesis_Christina_Pancevac.pdf"^^ . . . "Structural Characterisation of the Catalytic Core of the Class III Adenylyl Cyclase Rv0386 from Mycobacterium tuberculosis (Other)"^^ . . . . . . "indexcodes.txt"^^ . . . "Structural Characterisation of the Catalytic Core of the Class III Adenylyl Cyclase Rv0386 from Mycobacterium tuberculosis (Other)"^^ . . . . . . "lightbox.jpg"^^ . . . 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