<> "The repository administrator has not yet configured an RDF license."^^ . <> . . "Biochemische und zellbiologische Charakterisierung des Retromer-vermittelten Proteintransports in Pflanzen"^^ . "Rezeptoren saurer Hydrolasen, die für das Lysosom in Säugerzellen oder die Vakuole in Hefen bestimmt sind, zyklieren zwischen dem Golgi-Apparat und dem prävakuolären Kompartiment (PVC). Ihr Rücktransport vom prävakuolären Kompartiment zum Golgi-Apparat geschieht mit Hilfe eines pentameren Proteinkomplexes, dem sogenannten Retromer. Dieser Komplex wird an die Membran des PVC rekrutiert und bindet die Hydrolase-Rezeptoren. Der Retromerkomplex besteht aus zwei Subkomplexen, einem großen aus Vps35, Vps26 und Vps29 und einem kleinen aus Vps5 und Vps17 (vps für vacuolar protein sorting). Während der größere vermutlich die Frachtauswahl bedingt, ist der kleinere möglicherweise für die Vesikelbildung verantwortlich (Seaman et al., 1998). Seit der ersten Arbeit zu Vps35 aus Hefe (Paravicini et al., 1992) gelang es verschiedenen Arbeitsgruppen weitere strukturelle Bestandteile des Retromerkomplexes in Hefe und Säugern zu identifizieren und den retromervermittelten Transport vakuolärer bzw. lysosomaler Sortierungs¬rezeptoren auch funktionell zu charakterisieren (Haft et al., 2000; Seaman et al., 1998; Seaman, 2004; Arighi et al., 2004). In Pflanzenzellen hingegen lagen keinerlei dementsprechende Informationen zur Existenz oder Funktion eines retromervermittelten Transports vor. In der vorliegenden Arbeit wurden zunächst die Gene der den Hefen und Säugern homologen Retromerproteine AtVps35, AtVps26, AtVps29 und AtVps5 aus Arabidopsis identifiziert und aus cDNA isoliert. Die Proteine des großen Retromersubkomplexes wurden rekombinant exprimiert und Antikörper gegen deren GST-Fusionsproteine hergestellt. Mit Hilfe dieser Antikörper konnten in Pflanzenzellen AtVps35, AtVps26 und AtVps29 sowohl cytosolisch wie auch membrangebunden nachgewiesen werden. Des weiteren gelang es die Anwesenheit eines möglichen Retromerkomplexes in Salzextrakten von Arabidopsismikrosomen nachzuweisen und seine Größe durch Gelfiltration zu bestimmen. Dieser Komplex koequilibrierte im Saccharose¬dichtegradienten mit Membranen des PVC und mit Membranen aus hochdichten Fraktionen. Immunogoldmarkierung dieser Membranen aus den hochdichten Fraktionen mit Retromerantikörpern zeigte Markierungen von 90 nm großen proteinbeschichteten Mikrovesikeln bei denen es sich möglicherweise um retromerbeschichtete Vesikel handelt. CLSM-Immunfluoreszenzmikroskopie an Tabak-BY-2 Zellen zeigte ein hohes Maß an Kolokalisation der Retromermarkierungen mit denen der PVC-Marker AtPep12 und VSRAt 1. Die Anwesenheit der pflanzlichen Retromerproteine an der Oberfläche der multivesikulären Körper (MVBs) konnte zusätzlich an hochdruckgefrorenen und anschließend gefriersubstituierten BY-2 Zellen elektronenmikroskopisch nachgewiesen werden. Die Behandlung der BY 2 Zellen mit Wortmannin führte zu einem Anschwellen des PVCs und einer Trennung der vormals kolokalisierten Vps35- und VSR-Signale. Durch Immunpräzipitation konnte eine Interaktion von AtVps35 mit dem vakuolären Sortierungsrezeptor VSRAt-1 nachgewiesen werden. Alle diese Daten lassen auf eine Beteiligung der retromerbeschichteten Vesikel am retrograden Proteintransport vom PVC zum Golgi-Apparat schließen. Damit stützt diese Arbeit die Hypothese, dass der Rücktransport von vakuolären Sortierungsrezeptoren aus dem PVC nicht nur selektiv sondern auch retromervermittelt geschieht. Die Ergebnisse dieser Arbeit unterstreichen somit ferner die Auffassung, dass die Transportmaschinerie zum lytischen Kompartiment und das Rezeptorrecycling zwischen den endosomalen oder prävakuolären Kompartimenten und dem trans-Golgi-Netzwerk (TGN) grundsätzlich bei allen Eukaryoten, also auch den Pflanzen, hochkonserviert ist. "^^ . "2007" . . . . . . . . "Oliver"^^ . "Heinzerling"^^ . "Oliver Heinzerling"^^ . . . . . . "Biochemische und zellbiologische Charakterisierung des Retromer-vermittelten Proteintransports in Pflanzen (PDF)"^^ . . . "Heinzerling_Dissertation.pdf"^^ . . . "Biochemische und zellbiologische Charakterisierung des Retromer-vermittelten Proteintransports in Pflanzen (Other)"^^ . . . . . . "indexcodes.txt"^^ . . . "Biochemische und zellbiologische Charakterisierung des Retromer-vermittelten Proteintransports in Pflanzen (Other)"^^ . . . . . . "lightbox.jpg"^^ . . . 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