TY  - GEN
Y1  - 2007///
TI  - Dynamics of telomeres in a telomerase-negative human osteosarcoma cell
ID  - heidok7910
UR  - https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/7910/
A1  - Jegou, Thibaud
N2  - Die höhere Ordnung der Chromatinorganisation und ihre dynamischen Eigenschaften sind direkt mit Vorgängen wie Genexpression, Replikation, DNA Reparatur und Rekombination verbunden. In dieser Doktorarbeit wurde die Mobilität von Telomeren in einer humanen Osteosarcoma-Zellinie U2OS untersucht, in welche zuvor lacO-Operator Widerholungseinheiten an den Telomeren der Chromosomen 6, 11 und 12 stabil integriert wurden.Die Mobilität dieser drei Telomere wurde während der Interphase mittels Fluoreszenzmikroskopie durch gebundene LacI-Repressoren, welche mit autofluoreszenten GFP oder mRFP1 Domänen fusioniert waren, beobachtet. Durch Messungen der Distanzänderungen zwischen zwei markierten Telomerpaaren mittels Hochgeschwindigkeits-Lebendzellbeobachtung wurde ein begrenztes Diffusionsmodell abgeleitet, welches die Ortsveränderung der Telomere im Zellkern in einer Zeitskala von Millisekunden bis Stunden beschreibt. Drei Arten von Bewegungen wurden identifiziert: (i) Schnelle, lokale Bewegungen im (Milli-)Sekundenbereich mit einer Diffusionskonstante von Dms = 2?10-3 µm2 s-1, welche auf eine Region mit einem Radius von rms ~ 80 nm begrenzt waren, (ii) Bewegungen im Sekunden/Minutenbereich mir Dsec = 4?10-4 µm2 s-1 und rsec = 150 nm und (iii) Bewegungen im Minuten/Stundenbereich mit Dmin = 2?10-5 µm2 s-1. Für die letztgenannten Ortsveränderungen wurden mittlere Begrenzungsradien von rmin = 0.3 ± 0.1 µm bestimmt, wobei ein Anteil von ~ 30% der Telomere eine hohe ausgedehnte Mobilität mit rmin = 0.8 ± 0.4 µm zeigte. Dies legt den Schluss nahe, dass die Mehrheit der Telomere an eine stabile Struktur im Zellkern verankert ist , wogegen sich ein gewisser Anteil der Telomere freier bewegen kann. Darüberhinaus konnten wir zeigen, dass eine Korrelation zwischen einem Teil der Telomere mit kurzen Wiederholungssequenzlängen und Telomeren mit ausgeweiteter Mobilität besteht, was darauf hinweist, dass intakte Telomere zur Verankerung notwendig sind. Zudem wurde die Mobilität von Promyelozytische-Leukämie (PML) - Zellkernkörperchen relativ zu den Telomeren analysiert. Die PML Körperchen formten Komplexe mit den Telomeren in der Telomerase-negativen U2OS Zellinie. Diese wurden schon zuvor beschrieben im Weg einer alternativen Verlängerung von Telomeren (alternative lengthening of telomeres, ALT) involviert zu sein und daher ALT assoziierte PML Körperchen (ALT associated PML bodies, APBs) genannt. Die Dynamik der Bildung von APBs wurde beobachtet. Im Hinblick auf die Unterschiede der Telomermobilität, der Länge der Telomersequenzwiederholungen und ihrer Interaktion mit den PML Körperchen erstellten wir ein Modell zur Beschreibung der Dynamik des ALT Wegs.
KW  - Telomere 
KW  -  Telomerase-negative 
KW  -  PML body 
KW  -  APB 
KW  -  OsteosarkomTelomere 
KW  -  Telomerase-negative 
KW  -  PML body 
KW  -  APB 
KW  -  osteosarcoma
AV  - public
ER  -