title: RESOLFT-Mikroskopie mit photoschaltbaren Proteinen
creator: Hofmann, Michael
subject: ddc-530
subject: 530 Physics
description: Die RESOLFT-Fluoreszenzmikroskopie wurde entwickelt um eine prinzipiell unbegrenzte Auflösung der Fernfeld-Fluoreszenzmikroskopie über die Beugungsgrenze hinaus zu ermöglichen. Bisher wurde die RESOLFT-Mikroskopie einzig über die stimulierte Emission (STED) realisiert, welche sehr hohe Lichtintensitäten benötigt, um die zur Auflösungserhöhung nötige Unterdrückung der Fluoreszenz zu erreichen. Photobleichen begrenzt die einsetzbaren Intensitäten und damit auch die erreichbare Auflösung.In der vorliegenden Arbeit wird die Unterdrückung unerwünschter Fluoreszenz über das reversible Photoschalten zwischen langlebigen Konformationszuständen erreicht, wodurch sehr viel niedrigere Intensitäten (W/cm^2) als bei STED (GW/cm^2) zum Einsatz kommen. Dies vermindert Photostress und erlaubt die Verwendung einer vergleichsweise einfachen technischen Apparatur. Durch den Einsatz photoschaltbarer Proteine wurde erstmals ein RESOLFT-Mikroskop mit endogen exprimierbaren Fluoreszenzmarkern realisiert. Es konnte eine Auflösung von 50-100 nm erreicht werden, die nur durch Aberrationen und durch photophysikalische Eigenschaften der schaltbaren Proteine beschränkt ist. Diese Limitationen sind jedoch nicht von prinzipieller Natur, sondern können gezielt überwunden werden. So wurde an rsFastLime, einer Variante des photoschaltbaren Proteins Dronpa, gezeigt, dass fluoreszierende Proteine durch gezielte Mutagenese im Hinblick auf ihren Einsatz in der RESOLFT-Mikroskopie verbessert werden können.
date: 2007
type: Dissertation
type: info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
type: NonPeerReviewed
format: application/pdf
identifier: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserverhttps://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/7938/1/Dekanat_komp_jpeg_med_600pix.pdf
identifier: DOI:10.11588/heidok.00007938
identifier: urn:nbn:de:bsz:16-opus-79385
identifier:   Hofmann, Michael  (2007) RESOLFT-Mikroskopie mit photoschaltbaren Proteinen.  [Dissertation]     
relation: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/7938/
rights: info:eu-repo/semantics/openAccess
rights: http://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/help/license_urhg.html
language: ger