title: Generierung von biologisch aktivem Reg4 und HIP/PAP mit nachfolgender Charakterisierung angestoßener Signaltransduktionsprozesse innerhalb von Tumorzellen des Gastrointestinaltraktes
creator: Vocke, Dirk
subject: ddc-570
subject: 570 Life sciences
description: Zusammenfassung In der vorliegenden Arbeit wird die Rolle der „regeneration islet-derived gene family“ (Reg-Familie) im Zusammenhang der Krebsentstehung erläutert. Insbesondere wird dabei auf die Mitglieder Reg4 und HIP/PAP beim Menschen fokussiert. Daraus leiteten sich die Fragestellungen nach Reg4 und HIP/PAP abhängigen Signaltransduktionsmechanismen ab. Solche Prozesse sind für Reg4 und HIP/PAP bislang nur fragmentarisch verstanden. Eine strukturierte Signalkaskade induziert durch eine Transmembranrezeptorklasse ist nicht charakterisiert. Um hierzu neue Erkenntnisse zu liefern wurden Expressionsplasmide zur Generierung von Reg4 und HIP/PAP Protein generiert. Zu diesem Zweck wurden NS0-Zellen mit Reg4 und HIP/PAP Fc-Fusionsplasmiden transfiziert und durch Selektion Klone mit stabiler Expression hergestellt. Des Weiteren wurden Reg4- und HIP/PAP Expressionsplasmide ohne „Tag“ zur transienten Transfektion erzeugt. Durch Nutzen des transgen erzeugten amino- und carboxyterminalen „Fc-Tags“ wurden die Proteine gereinigt. Zum Nachweis von Reg4- und HIP/PAP-Protein wurden Antikörper produziert und charakterisiert. Für funktionelle Studien wurden Zelllinien auf endogene Expression von Reg4 und HIP/PAP hin analysiert und ausgewählt. Mit diesen Materialien wurden Stimulationsexperimente durchgeführt. Auf Ebene der Proteinphosphorylierungen wurden Reg4 und HIP/PAP abhängige Phosphorylierungen von zentral wirkenden Signaltransduktionsproteinen überprüft. Dabei konnte die Phosphorylierung von Erk1 und Erk2 in Abhängigkeit von Reg4 und HIP/PAP in Zellen mit endogener Reg4 Expression festgestellt werden. Diese Beobachtungen unterschieden sich von Zellen mit fehlender Reg4 Expression. So wurde in HT29-Zellen mit fehlender Reg4 Expression die Phosphorylierung von NFκB detektiert. Durch Mikroarray Studien wurde ein Expressionsprofil von HT29- Zellen nach Reg4 und HIP/PAP Stimulation erstellt, wobei Gene, die im Kontext von Apoptoseregulation und Migrationsprozessen als differentiell exprimiert ermittelt wurden. Durch Bindungsstudien sollten Hinweise auf eine mögliche Reg4 und/oder HIP/PAP Rezeptorfamilie erhalten werden, die es zu isolieren und zu charakterisieren gilt. Diese Experimente lieferten erste Indizien auf Zelllinien, die zu einer Rezeptorisolation herangezogen werden könnten.
date: 2007
type: Dissertation
type: info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
type: NonPeerReviewed
format: application/pdf
identifier: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserverhttps://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/8024/1/Doktorarbeit_DirkVocke.pdf
identifier: DOI:10.11588/heidok.00008024
identifier: urn:nbn:de:bsz:16-opus-80249
identifier:   Vocke, Dirk  (2007) Generierung von biologisch aktivem Reg4 und HIP/PAP mit nachfolgender Charakterisierung angestoßener Signaltransduktionsprozesse innerhalb von Tumorzellen des Gastrointestinaltraktes.  [Dissertation]     
relation: https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/8024/
rights: info:eu-repo/semantics/openAccess
rights: http://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/help/license_urhg.html
language: ger