<> "The repository administrator has not yet configured an RDF license."^^ . <> . . "Charakterisierung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors GBF1"^^ . "Im initiierenden Schritt der COPI-Vesikelbiogenese wird die kleine GTPase Arf1 von den beiden zur p24 Proteinfamilie gehörenden Typ I-Trans-membranproteinen p23 bzw. p24 an die Membran rekrutiert. Dort vermittelt GBF1 (Golgi-specific brefeldin A-resistance factor 1), ein sogenanntes Arf GEF (guanine nucleotide exchange factor), in Arf1 den Nukleotidaustausch von GDP nach GTP. Das nun in seinen aktiven Zustand überführte Arf1-GTP exponiert nach einer Konformationsänderung eine N-terminale amphiphatische Helix und einen Myristoylanker und bindet über diese fest an die Membran. Im Anschluss definieren Arf1-GTP und p23 bzw. p24 den sogenannten „priming complex“, über welchen das Hüllprotein Coatomer aus dem Cytosol an die Membran rekrutiert wird, was letztendlich zur Ausbildung eines COPI-Vesikels führt. Im Rahmen dieser Arbeit ist es nun erstmals gelungen, das für die COPI-Vesikelbiogenese physiologisch relevante Arf GEF GBF1, mit einem Molekulargewicht von ungefähr 200 kDa, im baculoviralen System zu exprimieren und anschließend aufzureinigen. Das rekombinante GBF1 wurde hinsichtlich seiner Fähigkeit charakterisiert, an isolierte Golgi-Membranen zu binden und an Arf1 den Nukleotidaustausch von GDP zu GTP durchzuführen. Zusätzlich wurde eine bereits beschriebene Interaktion von GBF1 mit Coatomer nachgewiesen, die in der hier vorliegenden Arbeit auf bestimmte Coatomer-Isotypen weiter eingegrenzt werden konnte. Durch Photokreuzvernetzungsstudien wurde eine direkte Interaktion von GBF1 mit p23 nachgewiesen. Sich daran anschließende Kompetitions- und Koimmunpräzipitations-Experimente zeigten, dass neben p23 auch die p24 Proteinfamilienmitglieder p24, p25, p26 und p27 in jeweils dimerer Form mit GBF1 interagieren. Wurde Arf1 in die Koimmunpräzipitations-Experimente eingeschlossen, so zeigten sich trimere Komplexe bestehend aus Arf1, GBF1 und dimeren Mitgliedern der p24 Familie. Mit Hilfe von Tryptophan Fluoreszenz Messungen in einem löslichen und liposomalen System wurde anschließend die Aktivität von GBF1 an Arf1 in der Gegenwart von monomeren und dimeren p24 Familienmitgliedern untersucht. Dabei zeigte sich, dass nur dimere p23, p24 und p27 die Aktivität von GBF1 inhibieren. Entsprechend fand sich in in vitro Experimenten eine verringerte Ausbeute an COPI-Vesikeln in der Gegenwart von p27. Neben der Inhibition von GBF1 sind p23, p24 und p27 wahrscheinlich auch für eine Inhibition der ArfGAP1 (GTPase-activating protein)-vermittelten GTP-Hydrolyse an Arf1 verantwortlich. Mit dem hier generierten, rekombinanten GBF1 steht nun eine weitere, physiologisch relevante Komponente der COPI Maschinerie für Interaktions- und Aktivitätsstudien zur Verfügung, wodurch diese Arbeit einen wichtigen Schritt zur vollständigen Aufklärung der COPI-Vesikelbiogenese liefert. "^^ . "2009" . . . . . . . . "Stefanie"^^ . "Hubich"^^ . "Stefanie Hubich"^^ . . . . . . "Charakterisierung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors GBF1 (PDF)"^^ . . . "HubichStefanie.pdf"^^ . . . "Charakterisierung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors GBF1 (Other)"^^ . . . . . . "indexcodes.txt"^^ . . . "Charakterisierung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors GBF1 (Other)"^^ . . . . . . "lightbox.jpg"^^ . . . "Charakterisierung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors GBF1 (Other)"^^ . . . . . . "preview.jpg"^^ . . . "Charakterisierung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors GBF1 (Other)"^^ . . . . . . "medium.jpg"^^ . . . "Charakterisierung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors GBF1 (Other)"^^ . . . . . . "small.jpg"^^ . . "HTML Summary of #9073 \n\nCharakterisierung des Guaninnukleotid-Austauschfaktors GBF1\n\n" . "text/html" . . . "570 Biowissenschaften, Biologie"@de . "570 Life sciences"@en . .