TY  - GEN
AV  - public
TI  - Hochspezifische Markierung des Chemotaxisproteins CheY in lebenden E. coli Bakterien zur Untersuchung der Diffusion mit Hilfe der bildgebenden Diffusionsmikroskopie
Y1  - 2009///
ID  - heidok9721
KW  - Quantum Dots 
KW  -  DIFIMQuantum Dots 
KW  -  Chemotaxis 
KW  -  Fluorescence 
KW  -  Single-molecule spectroscopy 
KW  -  DIFIM
A1  - Siegberg, Daniel Wolfgang
UR  - https://archiv.ub.uni-heidelberg.de/volltextserver/9721/
N2  - Eine Weiterentwicklung des SNAP-Tag Systems wurde erfolgreich eingesetzt, um das Chemotaxis Protein CheY in lebenden E. coli Bakterien hochspezifisch mit dem Farbstoff MR121 zu markieren. Unter Ausnutzung der Fluoreszenzlöschung des MR121 durch das Substrat Benzylguanin konnte die unspezifische Hintergrundfluoreszenz in lebenden Bakterien durch nicht gebundene Fluorophore um mehr als 90 % reduziert werden. Diese Reduktion ist ein sehr wichtiger Schritt im Hinblick auf die Anwendbarkeit hochspezialisierter fluoreszenzmikroskopischer Techniken und macht den SNAP-Tag zu einer sehr guten Alternative zu den fluoreszierenden Proteinen, deren mangelnde Photostabilität oftmals Einzelmolekülstudien entgegen steht. Unter Anwendung der bildgebenden Diffusionsmikroskopie (DIFIM) war es möglich, die Diffusionszeit des CheY innerhalb lebender E. coli Bakterien zu bestimmen und Heterogenitäten in verschiedenen Bereichen in den Zellen zu aufzulösen. Mit der Chemotaxis, die die Bewegung der Bakterien steuert, konnte mit dieser Methode erstmals eine biologisch hochrelevante Fragestellung bearbeitet werden. Zusätzliche Standard-FCS-Messungen in wässrigen Proteinlösungen in physiologischen Konzentrationsbereichen können zu einer Eichung der erhaltenen Diffusionszeiten dienen und somit die Interpretation von Messungen in biologischen Proben erleichtern. Untersuchungen der spektroskopischen Eigenschaften von Quantum Dots zeigten, dass auch sie grundsätzlich dazu genutzt werden können, intelligente, fluoreszenzgelöschte Sondensysteme zu entwickeln.
ER  -