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Konstruktion und Screening von Antikörperbibliotheken gegen Oberflächenantigene

Kürschner, Timo

English Title: Construction and screening of antibody libraries

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PDF, German
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Abstract

Die Phagedisplaytechnologie ist in den letzten Jahren eine der wichtigsten Methoden zur Gewinnung von humanen monoklonalen Antikörpern geworden. Die Herstellung von großen Antikörperbibliotheken mit Hilfe dieser Technik ist Voraussetzung für die erfolgreiche Selektion von Antikörpern gegen die unterschiedlichsten Antigene. Ziel der vorliegenden Arbeit war es sowohl große Antikörperbibliotheken erfolgreich Antikörper gegen Oberflächenantigene zu selektionieren, als auch die Methoden zu deren Bau zu verfeinern. Aus einer bestehenden Antikörperbibliothek, die aus den peripheren Blutlymphozyten von fünfzig Spendern aufgebaut worden war, wurden scFv-Fragmente gegen das HbsAg des HBV-Viruses isoliert. Die Fragmente erkennen sowohl rekombinant hergestelltes HbsAg, als auch natives auf dem Virus selbst. Diese scFv-Fragmente werden zudem in besonders großen Mengen in E.coli produziert, so daß das Framework für den Aufbau einer synthetischen Bibliothek geeignet ist. Mit einem neuen sensitiveren Phagen-ELISA auf Chemolumineszenzbasis wurden die Detektionsgrenze nach unten verschoben. Dadurch ist es möglich bereits 106 gebundene Phagen zu detektieren. Dieses Verfahren ist besonders sinnvoll einzusetzen, wenn nicht genügend Antikörper oder Antigen vorhanden ist und hat großes diagnostisches Potential bei gering exprimierten Zelloberflächenantigenen. Durch verschiedene methodische Änderungen bei der Amplifikation der humanen variablen Genregionen und bei der Herstellung von Phagedisplaybibliotheken gelang es, die Qualität solcher Bibliotheken zu steigern. Außerdem wurden durch umfangreiche Primerspezifitätstests die Grundlagen für klassenspezifische Patientenbibliotheken gelegt. Desweiteren wurde unter Verwendung von neu entworfenen Primern eine universelle IgM Bibliothek hergestellt und diese erfolgreich mit einem Zelloberflächenantigen (Egp2) gescreent.

Translation of abstract (English)

The phage display technology became in the last years one of the most important methods for the production of human monoclonal antibodies. The production of large antibody libraries with the help of this technique is a prerequisite for the successful selection of antibodies against different antigens. The goal of the available work was the successful screening of large antibody libraries as well as the refining of the methods to build them. From an existing antibody library, which had been composed of the peripheral bloodlymphocytes of fifty donors, scFv fragments were isolated against the HbsAg of the Hepatitis B Virus. The fragments detect both rekombinant HbsAg, and native on the virus. These scFv Fragments are produced in particularly large quantities in E.coli, so that the framework is suitable for the construction of a synthetic antibody library. With a more sensible phage ELISA on chemoluminescence base the detection level were shifted downward, thus it is possible to detect already 106 bound phages. This procedure is particularly reasonable, if the available amount of antibody or antigen is low and has a large diagnostic potential with lowly expressed cell surface antigens. By different methodical modifications in the amplification of the human variable gene regions and with the production of phage display libraries it succeeded to increase the quality of such libraries. Additionally by extensive primer specificity tests the bases for class-specific patient libraries were developed. Furthermore a universal IgM library was constructed and successfully screened with a cell surface antigen (Egp2).

Item Type: Dissertation
Supervisor: Little, Dr. Pro.Melvyn
Date of thesis defense: 9. November 2000
Date Deposited: 28. Dec 2000 00:00
Date: 2000
Faculties / Institutes: Service facilities > German Cancer Research Center (DKFZ)
Subjects: 570 Life sciences
Controlled Keywords: Antikörperbibliothek,Monoklonaler Antikörper,Hepatitis-B-Virus,Hepatitis-B-Surface-Antigen
Uncontrolled Keywords: single chain, Egp2
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